Enzymologie

Description

CM 

• Rappels des notions de base en enzymologie : site actif, thermodynamique, état de transition, régulation des enzymes…
• Enzymes michaëliennes (équation de Vi = F([S]), conditions de mesure de Vitesse initiale (Vi), KM, Vmax)
• Inhibiteurs réversibles des enzymes michaeliennes (impact sur Vmax et KM)
• Notion d’enzymes allostériques

TP

• Détermination de la Vmax, du KM de la phosphatase alcaline (PAL) avec le PNPP. Détermination du Ki d’un inhibiteur uncompétitif
• Purification de la PAL à partir d’un sérum humain par chromatographie d’exclusion de taille et d’échange d’ions
• Gel SDS-PAGE
• Influence du pH et de la température sur l’activité de la PAL
• Qualité des méthodes : limite de détection, fidélité, justesse

Compétences requises

• Connaissance de bases de chimie organique et de réactivité

• Connaissance des acides aminés et des structures des protéines

Compétences visées

CM :

• Maîtriser la terminologie et les concepts du fonctionnement normal d'un organisme

• Être capable de comprendre le rôle des enzymes dans le métabolisme, leur cinétique, leur régulation

• Avoir des notions d’inhibiteur et de régulateur des activités et de mécanismes enzymatiques

TP :

• Participer à la préparation et au rangement de son poste de travail

• Identifier et appliquer les réglementations spécifiques en matière d'hygiène et de sécurité en accord avec les BPL

• Suivre un protocole, interpréter un résultat avec un esprit critique

• Comprendre le rôle du contrôle qualité (initiation)

• Réaliser des cinétiques enzymatiques en continu et en point final. Maîtriser le principe et le suivi d’une purification de protéine. Mesurer des activités enzymatiques

Discipline(s)

• Sciences biologiques, fondamentales et cliniques

Contact